核酸检测的原理到底是什么？为什么会出现假阴性？

新冠疫情发生以来，核酸检测成为了一个高频词，核酸检测阳性是确诊新冠肺炎的重要标准。核酸检测的原理到底是什么？核酸检测为什么会出现假阴性？除了核酸检测，还有哪些技术可以检测新冠病毒呢？

 

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揭秘新冠病毒核酸检测原理

 

核酸检测其实是检测受测者体内是否有新冠病毒的核酸（RNA）。每种病毒的核酸内部都含有核糖核苷酸，不同的病毒所含的核糖核苷酸数量和排列顺序不同，使得每种病毒都具有特异性。

 

新冠病毒的核酸也是独特的，核酸检测就是对新冠病毒的核酸进行特异性检测。在进行核酸检测之前，需要采集受测者的痰液、咽拭子、肺泡灌洗液、血液等样本，对这些样本进行检测，就可以发现受测者的呼吸道感染了什么病菌。新冠病毒核酸检测常用的是咽拭子样本检测，将样本裂解提纯，从中提取出可能存在的新冠病毒核酸，检测的准备工作就做好了。

 

 

新冠病毒核酸检测主要用荧光定量RT-PCR技术，这种技术是荧光定量PCR技术与RT-PCR技术的结合。在检测过程中，先采用RT-PCR技术将新冠病毒的核酸（RNA）逆转录为对应的脱氧核糖核酸（DNA）；再采用荧光定量PCR技术，将得到的DNA进行大量复制，同时，使用特异性探针对复制得到的DNA进行检测，打上标记。如果存在新冠病毒核酸，仪器就可以检测到荧光信号，而且，随着DNA的不断复制，荧光信号不断增强，这样就间接检测到了新冠病毒的存在。

 

 

 

（图片来源于网络）

 

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为什么会出现假阴性现象

 

假阴性，就是指被检测者已经感染了新冠病毒，但是却没有检测出病毒核酸，即核酸检测为阴性。如果一个受测者没有出现相关症状，核酸检测又为阴性，就很容易让他放松警惕，可能带来更大范围的病毒传播，这也是新冠病毒的狡猾之处。

 

出现假阴性的原因主要有以下三方面：

 

第一，原始检测标本中新冠病毒核酸含量过低，低于能被检测到的下限。这与所采集样本的类型和采集的时机等都有关系。

 

第二，如果新冠病毒核酸与探针结合的部位发生变异，可能影响检测中探针的结合效率，导致荧光信号检测不到。

 

第三，假阴性也和检测技术的灵敏度有关。疫情发生初期，应用于临床的试剂盒不够成熟、灵敏度不够高，关于假阴性的报道频出。后来，随着技术水平的提高，检测的准确率迅速提高，假阴性率不断降低。

 

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核酸检测为阳性就是确诊了吗

 

核酸检测结果呈阳性，就可以确认受测者上呼吸道存在病毒核酸，但并不能直接确诊为新冠肺炎患者。在核酸检测为阳性的情况下，还要综合流行病学史对受测者进行进一步的诊断，如果受测者还有发热、咽痛、咳嗽、乏力等症状，以及与已确诊的感染者有接触史等，就可以诊断为确诊病例。

 

如果受测者没有任何相关症状，一般诊断为无症状感染者。无症状感染者也有传染性，而且一些无症状感染者后来也开始出现症状，变成了确诊患者。

 

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其他检测新冠病毒的技术

 

对受测者来说，从标本中分离出病毒是最权威的确诊依据，但是，分离病毒是比较危险的操作，需要在高防护级别的实验室中进行，而且耗时比较长、成本较高。一般医疗机构不具备这个条件，他们大多会采取检测血液中是否有病毒抗体的方法，来判断受测者是否感染了病毒，乙肝、艾滋病等都是通过这种方式进行检测的。

 

新冠病毒也可以通过这种免疫学检测的方法检测出来。面对新冠病毒的入侵，人体会进行“反抗”，产生特异性抗体IgM和IgG（免疫球蛋白M和免疫球蛋白G）。如果在受测者血液中检测出这两种特异性抗体，就可以说明受测者感染了新冠病毒。

 

怎么检测抗体呢？常用的是化学发光免疫分析法，也就是使用化学发光剂或特定的酶标记抗体或抗原，发生免疫反应形成复合物，洗涤后再加入发光剂，如果受测者血液中存在IgM和IgG这两种特异性抗体，化学发光仪就能检测到发光信号。这种化学发光免疫分析法，是目前最先进的免疫检测技术之一。它灵敏度高、特异性强、检测范围宽、出结果快，但检测成本较高。

 

此外，由于人体感染病毒后需要一定时间才能产生抗体，只有等抗体产生后才能检测到，这也导致抗体检测的时效性不强。乙肝、艾滋病等感染后需要2～3周才能产生抗体。新冠病毒感染后需要3天以上才能检测到IgM抗体，需要一周以上才能检测到IgG抗体。

 

所以，为了尽快抓住新冠病毒的尾巴，应用更多的是核酸检测，它可以更早发现新冠病毒的踪迹。

 

(本文来自：中国数字科技馆,原题《核酸检测的原理到底是什么？为什么会出现假阴性？》）